DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的種類和濃度對(duì)分離效果都有較大和影響。DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑種類的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì)。被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,離子對(duì)試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,弱堿或強(qiáng)酸,弱酸,如被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿,則選用的DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸。對(duì)于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品,離子對(duì)試劑種類的選擇并沒有 特殊要求.離子對(duì)試劑疏水性的差別可以通過調(diào)節(jié)離子對(duì)試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果.
DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的使用
“DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑不一定是表面活性劑，如己烷和庚烷磺酸鈉，又如三乙胺活四丁基溴化胺，不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒有泡末，用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉（或硫酸鈉），或者十六烷基溴化鈉（CTAB,一種做陰離子用的陽(yáng)性表面活性劑），在濃度高的時(shí)候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時(shí)流動(dòng)相里加的SDS或CTAB濃度一般不會(huì)太高，一般在0.1%以下，而且流動(dòng)相里有甲醇等有機(jī)溶劑，高濃度的有機(jī)溶劑有破乳的作用，因此，混合后的流動(dòng)相泡末應(yīng)該不會(huì)很多。另外，做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠，或者毛細(xì)管電泳里的MECC，SDS濃度很高，而且沒有或者有很少比例的有機(jī)改性劑，當(dāng)然會(huì)有氣泡，跟HPLC不*相同。”
使用DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑時(shí)，調(diào)節(jié)保留時(shí)間的方式與普通反相不同，變化有機(jī)相比例沒有改變PH值來(lái)得有效。
“當(dāng)流動(dòng)相PH值較高時(shí)，樣品以中性形式存在，那么正電荷較少，相應(yīng)的保留較弱；當(dāng)流動(dòng)相PH值較低時(shí)，樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在，那么正電荷與固定相上帶負(fù)電荷的-SO3強(qiáng)烈吸附，相應(yīng)的保留會(huì)非常強(qiáng)。”
“再說(shuō)明一下B物質(zhì)的pKa，其值為10.5，在pH為4.5、3.8時(shí)都以離子態(tài)存在，這點(diǎn)沒錯(cuò)，雖然都是離子態(tài)，都是99%以上，但從量上說(shuō)還是有點(diǎn)不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時(shí)都有一個(gè)平衡的狀態(tài)：B＋（H＋）＝＝（BH＋），這里存在著一個(gè)平衡常數(shù)K（或者說(shuō)離解常數(shù)），于是pH不同時(shí)，H＋不同，對(duì)應(yīng)的B、BH＋也不同。所以才會(huì)出現(xiàn)pH不同，保留值會(huì)不同。
網(wǎng)站首頁(yè) ◇ 技術(shù)支持 ◇ DikmaPureHPLC離子對(duì)試劑的選擇和使用
